Antimitotic and antimutagenic action of the Hymenaea stigonocarpa bark on dividing cells / Ação antimitótica e antimutagênica do ritidoma de Hymenaea stigonocarpa Mart ex Hayne na divisão celular

Abstract The objective of this study was to evaluate the action of Hymenaea stigonocarpa bark hydroalcoholic extract against a mutagenic compound using A. cepa meristematic root cells as a test system. The treatment groups were: Negative Control (NC) – distilled water; Positive Control (PC) – paracetamol at a concentration of 0.008 mg/mL, Jatoba Control (JC) – aqueous fraction jatobá-do-cerrado at 0.5 or 1.0 or 1.5 mg/mL, and Simultaneous Treatment (ST) - jatobá-do-cerrado aqueous fraction at a concentration of 0.5 or 1.0 or 1.5 mg/mL associated with paracetamol solution at a concentration of 0.008 mg/mL. All groups were analyzed at 24 and 48 h. Five onion bulbs (five replications) were used for each treatment group. The root tips were fixed in Carnoy and slides prepared by the crush technique. Cells were analyzed throughout the cell cycle, totaling 5,000 for each treatment group at each exposure time. Mitotic indices were subjected to statistical analysis using the chi-square test (p<0.05). From the results it was found that the ST group, at the three concentrations, significantly potentiated the antiproliferative effect of the test system cells when compared to PC, NC and TJ at the three concentrations. Furthermore, the three ST concentrations significantly reduced the number of cell aberrations when compared to the number of aberrant cells obtained for the PC, demonstrating antimutagenic action on the A. cepa test system cells.

Resumo O objetivo do presente trabalho foi avaliar a ação do extrato hidroalcólico do ritidoma de Hymenaea stigonocarpa frente a um composto mutagênico, utilizando como sistema teste as células meristemáticas de raízes de A. cepa. Os grupos tratamentos avaliados foram: Controle Negativo (CN) – água destilada; Controle Positivo (CP) – paracetamol na concentração de 0,008 mg/mL, Controle Jatobá (CJ) – fração aquosa de jatobá-do-cerrado na concentração de 0,5 ou 1,0 ou 1,5 mg/mL, e Tratamento Simultâneo (TS) – fração aquosa de jatobá-do-cerrado na concentração de 0,5 ou 1,0 ou 1,5 mg/mL associada a solução de paracetamol na concentração de 0,008 mg/mL. Todos os grupos foram analisados nos tempos de 24 e 48 h. Para cada grupo tratamento cinco bulbos de cebolas (cinco repetições) foram utilizados. As radículas foram fixadas em Carnoy e as lâminas preparadas pela técnica de esmagamento. Analisaram-se células em todo ciclo celular, totalizando 5.000 para cada grupo tratamento em cada tempo de exposição. Os índices mitóticos obtidos foram submetidos à análise estatística do Qui-quadrado (p<0,05). A partir dos resultados verificou-se que o grupo TS, nas três concentrações, potencializou o efeito antiproliferativo significativo as células do sistema teste quando comparado ao CP, CN e TJ nas três concentrações. Ainda, o TS nas três concentrações reduziu de forma significativa o número de aberrações celulares quando comparado com o número de células aberrantes obtidas para o CP, demonstrando ação antimutagênica as células do sistema teste A. cepa.

Viabilidade da cultura temporária de linfócitos, em diferentes tempos após coleta do sangue, para análise de cariótipo / Viability of lymphocyte culture, at different times after blood collection, for karyotype analysis

Introduction: Cytogenetics is the area of genetics that studies chromosomes, including numerical changes, and their relationship to structural imbalances. Among the classical cytogenetics tests, the GTG banding karyotype is the most widely used. The period of culture establishment is a critical step, which can affect the pre-analytical phase of the test. Objective: To evaluate, at different establishment times, culture viability and banding resolution. Material and methods: Collection of 10 ml blood from 10 subjects was carried out for culture analysis. For viability analysis, mitotic index (MI) and banding resolution were assessed. Results: The comparative analysis of MI showed significant difference between times. In the assessment of banding resolution, the mean value of the bands was higher at times zero and 24 hour. Discussion: The MI reflects inhibition of cell cycle progression and/or loss of ability to proliferate. When the pair analysis was performed, a difference between zero and 48 hours was observed. The average number of bands analyzed at times zero and 24 hours did not indicate difference in the quantity and quality of the bands when cultures were grown immediately after blood collection or within 24 hours. At the 48th hour after blood collection significant reduction of band resolution was observed. Conclusion: These data highlight the importance of the biological material quality, as viability is lower when the culture is grown after 24 hours, as well as the banding resolution...

Introdução: Citogenética é a área da genética que estuda os cromossomos, incluindo alterações numéricas, estruturais e sua relação com distúrbios. Nos exames de citogenética clássica, o cariótipo com bandamento GTG é a metodologia mais utilizada, sendo o período de implantação da cultura uma fase crítica, que pode comprometer a fase pré-analítica do exame. Objetivo: Avaliar, em diferentes tempos de implantação, a viabilidade das culturas e o número de bandas. Material e métodos: Foram colhidos 10 ml de sangue de 10 sujeitos para realização das culturas. Para análise da viabilidade, foram utilizados o índice mitótico (IM) e a análise de resolução por bandamento. Resultados: A comparação dos valores do IM demonstrou desigualdade entre os diferentes tempos analisados. Na análise de resolução, o valor médio das bandas foi maior nos tempos zero e 24 horas. Discussão: O IM reflete a inibição da progressão do ciclo celular e/ou a perda da capacidade de proliferação. Quando o IM foi comparado dois a dois, verificou-se a diferença entre os tempos zero e 48 horas. O número médio de bandas analisadas nos tempos de zero e 24 horas mostrou que não houve diferença na quantidade e na qualidade das bandas quando as culturas foram implantadas logo após a coleta do sangue ou em até 24 horas. No tempo de 48 horas, houve significativa redução da resolução. Conclusão: Os dados obtidos reforçam a importância da qualidade do material biológico, visto que a viabilidade decai quando a implantação da cultura é realizada após 24 horas, assim como a resolução das bandas...

Alterations in the mitotic index of Allium cepa induced by infusions of Pluchea sagittalis submitted to three different cultivation systems

We evaluated the antiproliferative effect of infusions from Pluchea sagittalis using the Allium cepa test. Infusions in three concentrations (2.5, 5, and 25 g dm-3) of leaves cultivated in three environments (in vitro, acclimatized growth chamber, and field) were used. Six onion bulbs were used for each of the eight treatments, and the mitotic index was obtained from 6000 cells per treatment. In conclusion, leaf infusions of P. sagittalis cultivated in the field have a high antiproliferative activity, as well as the cultivation system influences the antiproliferative potential.

Avaliou-se o efeito antiproliferativo de infusões de Pluchea sagittalis usando o teste de Allium cepa. Foram usadas infusões em três concentrações (2,5, 5 e 25g dm-3) de folhas cultivadas em três ambientes (in vitro, sala de crescimento climatizada e em campo). Foram usados seis grupos de bulbos para cada um dos 8 tratamentos e o os índices mitóticos foram obtidos a partir de 6000 células por tratamento. Concluiu-se que a infusão de folhas de P. sagittalis cultivadas em campo possui grande atividade antiproliferativa, bem como o sistema de cultivo de plantas influencia o potencial antiproliferativo.

Assessment of cell proliferation and prognostic factors in canine mammary gland tumors / Avaliação da proliferação celular e fatores prognósticos em tumores mamários caninos

Three methods for the analysis of cell proliferation, mitotic index/10 high-power fields (10 HPF), mitotic index/four sets of 10 HPF (40 HPF), and MIB-1 index were evaluated in a series of canine mammary gland tumors, as well as the possible correlation between them. Fifty-six canine mammary gland tumors, including 23 benign and 33 malignant, were studied. In addition, the prognostic impact of mitotic index/10 HPF, and histological malignancy grade were evaluated in 17 malignant tumors, being seven ductal and 10 metaplastic carcinomas. The three methods used to evaluate cell proliferation were correlated with the prognostic impact of mitotic index/10 HPF and histological malignancy grade. The results showed a strong association between mitotic figure counts and MIB-1 index (P<0.0001). A correlation was observed between mitotic count per 40 HPF and MIB-1, and between mitotic index per 10 HPF and 40 HPF (P<0.05). Moreover, histological malignancy grade and mitotic figure counts were excellent prognostic factors during three-year follow-up (P<0.05). There was a correlation between the three methods used for the evaluation of cell proliferation and prognostic factors as observed in human breast cancer studies.

Avaliaram-se três métodos de proliferação celular, índice mitótico/10 campos de grande aumento (10 CGA), quatro vezes 10 CGA (40 CGA) e índice de marcação por MIB-1, em uma série de tumores mamários caninos, e as possíveis correlações entre estes métodos. Foram estudados 56 tumores mamários caninos, 23 benignos e 33 malignos. Foi também avaliado o impacto prognóstico do índice mitótico (10 CGA) e o grau histológico maligno em 17 tumores malignos, sete carcinomas ductais e 10 carcinomas metaplásicos. A correlação entre os três métodos para avaliar a proliferação celular e o impacto prognóstico do índice mitótico por 10 CGA e o grau histológico maligno foi realizada. Os resultados mostraram que existe uma forte associação entre contagem de mitose e o índice de marcação por MIB-1(P<0,0001) e correlação entre contagem de mitoses em 40 CGA e índice de marcação por MIB-1 e entre índice mitótico em 10 CGA e 40 CGA (P<0,05). Observou-se correlação entre os três métodos de avaliação da proliferação celular e os fatores prognósticos semelhante aos estudos de câncer de mama humano.

Valor prognóstico do grau histológico (GH), grau nuclear (GN) e índice mitótico (IM) para pacientes com carcinoma da mama estádios II e III com linfonodos axilares comprometidos / Prognostic value of histological and nuclear grades and mitotic index for patients with stages II and III breast carcinoma with positive axillary lymph nodes

Avaliar o grau histológico (GH), grau nuclear (GN) e índice mitótico (IM) como fatores prognósticos para metástase em pacientes com carcinoma da mama, estádios clínicos II e III com linfonodos axilares comprometidos. Métodos: Cinquenta e três pacientes foram submetidas a tratamento cirúrgico primário, através de mastectomia radical (Halsted) ou radical modificada (Patey), à quimioterapia e à radioterapia em parede torácica e fossa supraclavicular. O esquema quimioterápico compreendeu fluoracil, adriamicina e ciclofosfamida para pacientes com 50 anos ou menos; fluoracil, metrotrexate e ciclofosfamida para pacientes com mais de 50 anos. A presença de doença sistêmica foi, inicialmente, descartada e todas essas pacientes foram avaliadas por período mínimo de cinco anos ou até o aparecimento de metástases. O GH foi determinado através do método deScarf-Bloom-Richardson modificado, o GN pelo método de Black modificado e o IM em dez campos de grande aumento (CGA) na periferia do tumor. Resultados: Das 53 pacientes, 27 (50,9 por cento) apresentaram metástases à distância. Destas, 18,5 por cento eram portadoras de tumores GH I (5/27); 14,8 por cento GH II (4/27) e 66,7 por cento GH III (18/27). Vinte seis (49,1 por cento) pacientes não apresentaram metástases. Destas, 38,4 por cento foram classificadas como grau I (10/26), 15,4 por cento como grau II (4/26) e 46,2 por cento como grau III (12/26). O estudo do GN demonstrou que, das pacientes com metástases, 3,7 por cento (1/27) apresentavam tumor grau I, 22,2 por cento (6/27) tumores grau II e 74,1 por cento (20/27) tumorescom grau III. Das sem metástases, 19,2 por cento (5/26) foram grau I, 34,6 por cento (9/26) grau II e 46,2 por cento (12/26) tumores grau III. Em relação ao IM, das pacientes com metástases, 14,8 por cento (4/27) apresentavam até cinco mitoses em 10 CGA, 25,9 por cento (7/27) seis a dez mitoses e 59,3 por cento (16/27) mais de dez mitoses. Em relação às sem metástases, 38,5 por cento(10/26) apresent...

Antígeno nuclear de proliferaçäo celular em tumores de adrenal / Nuclear antigen of cell proliferating in adrenal tumors

Fez-se um estudo imunohistoquímico do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) em 26 adenomas e 24 carcinomas de adrenal através da técnica da avidina-biotina-peroxidase. O índice de marcação (IP) do PCNA, definido com o número de células marcadas/1000 contadas, foi em média de 77,4 +/- 66,1 (mediana - 63,5) para os adenomas enquanto que para os carcinomas foi 215,8 +/- 56,0 (mediana - 217,5) (p<0,0001). Estabelecendo-se o IP de 100 o marcador (para a discriminação de carcinomas dos adenomas) o marcador exibiu sensibilidade, especificidade e valor preditivo positivo seguintes, respectivamente: 100 por cento, 69 por cento e 75 por cento.

Papel do MIB-1 no prognóstico dos carcinomas da córtex de supra-renal / Role of MIB-1 on prognosis of adrenocortical carcinomas

Estudou-se a marcação imunohistoquímica para o MIB-1 (Ki-67) em 24 carcinomas da córtex adrenal. A idade dos pacientes variou de 1 a 53 anos, com mediana de 7,5. Excetuando 1 paciente com doença avançada, todos foram submetidos à adrenalectomia. O tempo de seguimento variou de 1 a 13 anos. No momento do diagnóstico 7/24 pacientes já apresentavam metástases e no decorrer do seguimento 3 pacientes adicionais as desenvolveram. A média do peso tumoral dos sobreviventes livres da doença foi de 400 +/- 687 g enquanto que nos falecidos ou com neoplasia após a cirurgia foi de 508 +/- 335 g, diferença essa sem significado estatístico. Tumores maiores que 200 g mostraram pior prognóstico do que aqueles com peso menor (p = 0,01). Os valores médios do índice mitótico (IM) para tumores em estádio I, II, III e IV foram respectivamente: 17,4 +/- 10,0, 12,4 +/- 11,2, 18,3 +/- 14,0 e 28,3+/- 21,0. A comparação das médias revelou p>0,2. Os valores médios do índice de proliferação(IP) determinado pelo MIB-1 nos estádios I, II, III e IV foram respectivamente: 201,4 +/- 131,0, 179,6 98,7, 129,1 +/- 170,2 e 124,0 +/- 99,4. A comparação estatística dessas médias mostrou p>0,3. Valores do IP maiores que 20 estão associados a pior prognóstico. O IP não mostrou relação com o prognóstico.